สเต็มเซลล์สด vs แช่แข็ง: วิธีประเมินคุณภาพเซลล์

รอบการแช่แข็งและละลายเปลี่ยนแปลงอะไรบ้าง?

การแช่แข็ง (cryopreservation) คือการเก็บเซลล์ในไนโตรเจนเหลวร่วมกับสารป้องกัน เพื่อให้เก็บเป็นคลังและขนส่งได้ เป็นเทคนิคมาตรฐานของห้องปฏิบัติการและมีประโยชน์จริง คือช่วยให้ห้องปฏิบัติการสำรองเซลล์และส่งมอบตามกำหนดเวลาได้ สิ่งที่ต้องแลกคือขั้นตอนการละลาย งานวิจัยปี 2014 จาก Karolinska Institutet (Moll et al., Stem Cells) เปรียบเทียบมีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ที่ผ่านการแช่แข็งและละลาย กับเซลล์ที่เก็บเกี่ยวจากการเพาะเลี้ยงต่อเนื่อง และพบว่าเซลล์ที่ผ่านการละลายมีคุณสมบัติด้านการปรับภูมิคุ้มกันและการควบคุมระบบเลือดบกพร่อง งานวิจัยในห้องปฏิบัติการก่อนหน้านั้น (François et al., Cytotherapy, 2012) เชื่อมโยงการละลายกับการตอบสนองต่อความร้อน (heat-shock response) ในเซลล์ ผลการศึกษายังไม่เป็นไปในทิศทางเดียวกัน งานวิจัยปี 2019 (Tan et al., Scientific Reports) พบความมีชีวิตของเซลล์ขณะละลายใกล้เคียงกัน และศักยภาพที่เทียบเคียงได้ในการทดสอบในห้องปฏิบัติการและในแบบจำลองสัตว์ แม้เซลล์ที่ผ่านการละลายจะมีเซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิส (apoptosis) มากขึ้นหลังผ่านไปสี่ชั่วโมง

ผลิตภัณฑ์เซลล์สดข้ามขั้นตอนนั้นไป เซลล์ถูกปล่อยออกจากการเพาะเลี้ยงและนำไปให้ผู้รับการรักษาโดยไม่ผ่านการแช่แข็งในระหว่างนั้น วิธีนี้ตัดแหล่งความแปรปรวนออกไปหนึ่งแหล่ง แต่ต้องอาศัยการประสานงานใกล้ชิดระหว่างห้องปฏิบัติการกับคลินิก เพราะเซลล์สดแต่ละล็อตมีช่วงเวลาใช้งานสั้น

คำถามที่ตรงประเด็นไม่ใช่ "สดหรือแช่แข็ง?" เพียงอย่างเดียว แต่คือ หากแช่แข็ง ความมีชีวิตของเซลล์หลังละลายที่วัดจากล็อตนี้เป็นเท่าไร? หากเป็นเซลล์สด ระยะเวลาระหว่างการปล่อยล็อตจนถึงการให้เซลล์นานเท่าไร? ไม่ว่าคำตอบใด ควรเจาะจงและชัดเจน

พาสเสจคืออะไร และทำไมต้องพาสเสจที่ 3?

ปริมาณเซลล์ในการรักษาหนึ่งครั้งนับเป็นหลักล้านเซลล์ และไม่มีตัวอย่างเนื้อเยื่อใดที่มีเซลล์มากขนาดนั้น จึงต้องเพาะขยายเซลล์ในห้องปฏิบัติการ ทุกครั้งที่แบ่งเซลล์ที่เพาะเลี้ยงไปยังภาชนะใหม่ นับเป็นหนึ่งพาสเสจ พาสเสจที่ 1 คือการขยายครั้งแรก ส่วนพาสเสจที่ 10 หมายถึงเซลล์ถูกแบ่งมาแล้วสิบครั้ง

ทุกพาสเสจทำให้เซลล์ห่างจากเนื้อเยื่อต้นกำเนิดมากขึ้นทีละน้อย ในการศึกษา MSC ของมนุษย์ที่เพาะขยาย 7 ถึง 12 พาสเสจ (Wagner et al., PLoS One, 2008) เซลล์มีขนาดใหญ่ขึ้น การแสดงออกของโปรตีนบนผิวเซลล์บางชนิดน้อยลง และในที่สุดก็หยุดแบ่งตัว โดยการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีนสะสมต่อเนื่องในทุกพาสเสจ ไม่ได้ปรากฏเฉพาะช่วงท้าย พาสเสจต้น ๆ จึงรักษาลักษณะดั้งเดิมไว้ได้มากกว่า

Healthi Life ปล่อยเซลล์ที่พาสเสจที่ 3 ซึ่งเร็วพอที่จะคงลักษณะของพาสเสจต้น และมากพอที่จะได้ปริมาณเซลล์ตามที่โปรโตคอลของเรากำหนด (5 หรือ 10 ล้านเซลล์สำหรับโปรโตคอลเฉพาะที่) คลินิกที่ไม่สามารถบอกพาสเสจของเซลล์ได้ ก็ไม่สามารถบอกได้ว่าเซลล์ถูกเพาะขยายมามากเพียงใด

สเต็มเซลล์แต่ละล็อตควรมีความมีชีวิตของเซลล์เท่าไร?

ความมีชีวิตของเซลล์คือร้อยละของเซลล์ที่ยังมีชีวิตในล็อต วัด ณ เวลาที่ห้องปฏิบัติการปล่อยล็อตนั้น เป็นคุณสมบัติของล็อตนั้น ไม่ใช่ของแบรนด์หรือของห้องปฏิบัติการโดยรวม ตัวเลขที่มีความหมายจึงเป็นตัวเลขที่ระบุในใบรับรองผลการวิเคราะห์ของเซลล์ที่ท่านได้รับ ห้องปฏิบัติการจะกำหนดเกณฑ์การปล่อยล็อตไว้ล่วงหน้า ล็อตที่วัดได้ต่ำกว่าเกณฑ์จะไม่ถูกปล่อยออก ที่ Healthi Life แต่ละล็อตจะถูกปล่อยออกเมื่อผลตรวจยืนยันความมีชีวิตของเซลล์ 98-99% แล้ว โดยบันทึกไว้ในใบรับรองผลการวิเคราะห์ของห้องปฏิบัติการพันธมิตร

สำหรับผลิตภัณฑ์แช่แข็ง คำถามจะเปลี่ยนไป ความมีชีวิตที่วัดก่อนแช่แข็งไม่ได้บอกอะไรเกี่ยวกับเซลล์หลังละลาย จึงควรขอตัวเลขความมีชีวิตหลังละลาย ที่วัดจากล็อตเดียวกันหลังละลายและไม่นานก่อนให้เซลล์ ความมีชีวิตของเซลล์บ่งบอกคุณภาพของผลิตภัณฑ์ ไม่ได้ทำนายว่าแต่ละบุคคลจะตอบสนองอย่างไร

เซลล์มาจากไหน?

มีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ (MSC) สามารถแยกได้จากเนื้อเยื่อหลายชนิด และแหล่งที่มากำหนดสามเรื่อง ได้แก่ ขั้นตอนการเก็บเซลล์ การคัดกรองที่ผู้บริจาคหรือผู้รับการรักษาต้องผ่าน และลักษณะที่เซลล์สะท้อนออกมา เกณฑ์ขั้นต่ำที่เผยแพร่โดย International Society for Cellular Therapy (Dominici et al., Cytotherapy, 2006) นิยาม MSC จากคุณสมบัติในห้องปฏิบัติการ (เกาะติดพื้นผิวพลาสติก มีโปรตีนบนผิวเซลล์ชุดหนึ่ง และสามารถเปลี่ยนเป็นเซลล์กระดูก กระดูกอ่อน และเซลล์ไขมันในการเพาะเลี้ยง) ไม่ใช่จากเนื้อเยื่อที่เป็นแหล่งกำเนิด แหล่งที่มาจึงเป็นอีกคำถามหนึ่งที่ต้องถามแยกต่างหาก

Healthi Life ใช้ MSC จากสายสะดือส่วนวอร์ตันเจลลี (Wharton's jelly) จากผู้บริจาคที่ผ่านการคัดกรอง เตรียมโดยห้องปฏิบัติการพันธมิตรที่ได้รับการรับรอง ISO 9001:2015 และได้มาตรฐาน GMP เนื่องจากเซลล์จากสายสะดือมาจากผู้บริจาค บันทึกการคัดกรองผู้บริจาคจึงเป็นส่วนหนึ่งของเอกสารที่ห้องปฏิบัติการจัดทำสำหรับแต่ละล็อต ท่านสามารถสอบถามทุกคลินิกได้ว่าคัดกรองผู้บริจาคอย่างไร และตรวจอะไรบ้าง

คลินิกพิสูจน์คุณภาพเซลล์ได้อย่างไร?

ทุกคลินิกบอกว่าเซลล์ของตนมีคุณภาพสูง ความแตกต่างอยู่ที่สิ่งที่แสดงเป็นเอกสารได้ สำหรับล็อตที่ท่านได้รับ ไม่ใช่สำหรับห้องปฏิบัติการโดยรวม ต่อไปนี้คือสิ่งที่ควรถาม คำตอบที่แท้จริงควรเป็นอย่างไร และคำตอบของเรา

ใบรับรองผลการวิเคราะห์ที่ครบถ้วนยังรายงานผลการตรวจความปราศจากเชื้อ ไมโคพลาสมา และเอนโดท็อกซิน รวมถึงโปรตีนบ่งชี้ชนิดเซลล์ ควรสอบถามว่าผลใดบ้างที่ออกครบก่อนปล่อยล็อต International Society for Cellular Therapy เสนอว่าการตรวจก่อนปล่อยล็อตควรรวมการวัดเชิงหน้าที่ว่าเซลล์ทำงานอย่างไร ไม่ใช่เพียงนับจำนวนเซลล์ที่มีชีวิต (Galipeau et al., Cytotherapy, 2016) นี่คือเหตุผลหนึ่งที่ตัวเลขความมีชีวิตเพียงตัวเดียวไม่เคยบอกภาพทั้งหมด สำหรับรายการตรวจสอบที่กว้างกว่านี้ (ใบอนุญาตของแพทย์และสถานพยาบาล ประเภทตามกฎระเบียบ ราคา และการติดตามผล) ดูคู่มือวิธีเลือกคลินิกสเต็มเซลล์ในประเทศไทย

MSC ชนิดกระดูกอ่อน (chondrogenic) ใช้เมื่อใด?

MSC มาตรฐานถูกเพาะขยายในอาหารเลี้ยงเซลล์ทั่วไป ส่วน MSC ชนิดกระดูกอ่อน (chondrogenic MSC) เตรียมด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์ที่ชักนำให้เซลล์มีกิจกรรมการสร้างกระดูกอ่อนก่อนปล่อยล็อต ใช้ในโปรโตคอลข้อที่มุ่งเน้นกระดูกอ่อน โดยฉีดเข้าข้อโดยตรง บางครั้งใช้ร่วมกับการให้ทางหลอดเลือดดำ เกณฑ์คุณภาพข้างต้นใช้กับเซลล์ชนิดนี้เช่นเดียวกัน ได้แก่ สดหรือแช่แข็ง พาสเสจ ความมีชีวิตเมื่อปล่อยล็อต และแหล่งที่มา ซึ่งควรสอบถามสำหรับล็อตชนิดกระดูกอ่อนเหมือนล็อตอื่น

โปรโตคอลชนิดกระดูกอ่อนไม่ใช่ทางเลือกที่เหมาะกับทุกคน หลักฐานในมนุษย์สำหรับ MSC ที่ผ่านการชักนำล่วงหน้ายังมีจำกัด จะพิจารณาเมื่อกระดูกอ่อนเป็นเป้าหมายหลัก และตัดสินใจหลังการปรึกษาแพทย์และการทบทวนภาพถ่ายทางรังสี (MRI หรือเอกซเรย์) แพทย์จะพิจารณาว่าเป็นข้อใด ภาพถ่ายแสดงอะไร และผู้รับการรักษาคาดหวังอะไร แล้วอาจแนะนำโปรโตคอลมาตรฐาน โปรโตคอลชนิดกระดูกอ่อน หรือไม่แนะนำทั้งสองแบบ สำหรับโปรแกรมข้อต่อฉบับเต็ม ดูสเต็มเซลล์สำหรับข้อเสื่อมในกรุงเทพฯ

ทำสเต็มเซลล์ซ้ำได้บ่อยแค่ไหน?

ไม่มีตารางการรักษาซ้ำที่เป็นมาตรฐาน ผู้รับการรักษาส่วนใหญ่ได้รับการรักษาอีกครั้งหลังหนึ่งถึงสามปี ระยะห่างขึ้นกับความรุนแรงของภาวะและเป้าหมายที่กำหนดในการปรึกษา การตัดสินใจเกิดขึ้นในการติดตามผล ไม่ได้กำหนดไว้ตามปฏิทินในการพบแพทย์ครั้งแรก ควรระมัดระวังแผนใดก็ตามที่ขายการรักษาเป็นชุดล่วงหน้า ก่อนที่โปรโตคอลแรกจะได้รับการทบทวนเสียอีก

การติดตามผลหมายถึงแพทย์เปรียบเทียบผลการประเมินปัจจุบันกับผลก่อนโปรโตคอลแรก ทั้งอาการ การใช้งานของร่างกาย ภาพถ่ายทางรังสีเมื่อเกี่ยวข้อง และผลตรวจทางห้องปฏิบัติการ การตรวจเลือดพื้นฐานก่อนโปรโตคอลแรกทำให้เปรียบเทียบได้ในภายหลัง การตรวจสุขภาพของเราเป็นวิธีหนึ่งในการสร้างข้อมูลพื้นฐานนี้ หากการทบทวนไม่พบเหตุผลที่ต้องทำซ้ำ คำตอบคือไม่ต้องทำซ้ำ และนั่นเป็นผลลัพธ์ที่สมเหตุสมผลของการพบแพทย์ครั้งนั้น

สเต็มเซลล์ที่ Healthi Life กรุงเทพฯ ราคาเท่าไร?

ราคาขึ้นกับโปรโตคอลและปริมาณเซลล์ เราเปิดเผยราคาทั้งหมด ไม่มีราคาขีดฆ่าและไม่มีข้อเสนอจำกัดเวลา

โปรโตคอล ปริมาณเซลล์ และราคาสุดท้ายจะยืนยันโดยแพทย์หลังการปรึกษา รายละเอียดโปรแกรมทั้งหมด: สเต็มเซลล์บำบัดในกรุงเทพฯ

ห้าคำถามที่ควรถามทุกคลินิกมีอะไรบ้าง?

1. เซลล์เป็นเซลล์สดหรือแช่แข็ง? หากแช่แข็ง ความมีชีวิตของเซลล์หลังละลายของล็อตนี้เป็นเท่าไร?
2. เซลล์ถูกปล่อยที่พาสเสจที่เท่าไร?
3. เกณฑ์ความมีชีวิตของเซลล์สำหรับการปล่อยล็อตคือเท่าไร และขอดูใบรับรองผลการวิเคราะห์ของล็อตที่ได้รับได้หรือไม่?
4. เซลล์มาจากแหล่งใด และคัดกรองผู้บริจาคอย่างไร?
5. แพทย์ท่านใดเป็นผู้ประเมิน สั่งโปรโตคอล และติดตามผล?

คำตอบที่เจาะจงและเป็นลายลักษณ์อักษรคือมาตรฐาน คำตอบที่คลุมเครือก็เป็นข้อมูลเช่นกัน

เอกสารอ้างอิง

1. Moll G, et al. Do cryopreserved mesenchymal stromal cells display impaired immunomodulatory and therapeutic properties? Stem Cells. 2014;32(9):2430-2442. doi:10.1002/stem.1729
2. François M, et al. Cryopreserved mesenchymal stromal cells display impaired immunosuppressive properties as a result of heat-shock response and impaired interferon-γ licensing. Cytotherapy. 2012;14(2):147-152. doi:10.3109/14653249.2011.623691
3. Tan Y, et al. Thawed mesenchymal stem cell product shows comparable immunomodulatory potency to cultured cells in vitro and in polymicrobial septic animals. Scientific Reports. 2019;9:18078. doi:10.1038/s41598-019-54462-x
4. Wagner W, et al. Replicative senescence of mesenchymal stem cells: a continuous and organized process. PLoS One. 2008;3(5):e2213. doi:10.1371/journal.pone.0002213
5. Dominici M, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315-317. doi:10.1080/14653240600855905
6. Galipeau J, et al. International Society for Cellular Therapy perspective on immune functional assays for mesenchymal stromal cells as potency release criterion for advanced phase clinical trials. Cytotherapy. 2016;18(2):151-159. doi:10.1016/j.jcyt.2015.11.008

Dr. Sarassawadee Suwanjinda (Dr. Petch)

Verified Physician

Co-Founder & Chief Medical Strategy Officer

International Board of Lifestyle Medicine (IBLM) Diplomate

Dr. Sarassawadee Suwanjinda (Dr. Petch) is Co-Founder & Chief Medical Strategy Officer at Healthi Life, an International Board of Lifestyle Medicine (IBLM) Diplomate. She leads the longevity programs — biological-age and biomarker-driven protocols designed and re-tested over time.

Longevity MedicineBiomarkersBiological AgeFunctional Medicine

View full profile →LinkedIn